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產(chǎn)品說明
E. coli 核酸內(nèi)切酶 III（Nth）既有 N-糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-糖基化酶活性可釋放雙鏈 DNA 上受損的嘧啶堿基，產(chǎn)生一個脫嘧啶（AP）位點。AP-裂解酶活性則切割 AP 位點的 3′ 端，產(chǎn)生一個 5′ 磷酸和一個 3′ 磷酸-α,β不飽和醛。
被核酸內(nèi)切酶 III 識別并切除的受損堿基包括：尿素、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羥基-5-甲內(nèi)酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二羥基胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲。
本公司核酸內(nèi)切酶 III是重組表達，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在37℃下， 1×核酸內(nèi)切酶 III反應(yīng)緩沖體系下，1小時能切割1 pmole含一個AP 位點的 34 bp 寡核苷酸雙鏈所需的酶量。
活性測定條件
1× Endonuclease III反應(yīng)緩沖液：20 mM Tris-HCl（pH 8.0），1 mM EDTA，1 mM DTT，37℃ 溫育。
濃度：10U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復(fù)凍融
特點與應(yīng)用
? 單細胞凝膠電泳（彗星試驗）
? 損傷DNA修復(fù)
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE1109A | AE1109B |
核酸內(nèi)切酶 III | 500U | 2500U |
10×核酸內(nèi)切酶 III Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
質(zhì)量控制
經(jīng)過嚴格的質(zhì)控檢測，確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl（pH 8.0），10 mM EDTA，100 mM NaCl, 1mM DTT
相關(guān)產(chǎn)品
AE1101：EcUDG
使用實例：
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積或濃度 |
10×Buffer | 2μl |
底物DNA | 5-10pmole |
Endonuclease III (10U/μl) | 1μl |
H2O | Variable |
總體積 | 20μl |
2）37℃×60min反應(yīng)，
3）尿素變性PAGE電泳檢測酶切產(chǎn)物，或按實驗?zāi)康倪M行后續(xù)操作。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實驗使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項
l 本酶不同于內(nèi)切核酸酶IV，切斷AP位點后，斷裂位點的3’末端為磷酸基團，不能夠被DNA聚合酶延伸。
l AP裂解酶活性產(chǎn)生的3’末端磷酸基團可以利用內(nèi)切核酸酶IV去除，生成3’-OH，由DNA聚合酶進行延伸反應(yīng)
