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產品說明
本酶為 HotStart Taq DNA 聚合酶，需 95 度加熱 5 分鐘或 98 度加熱 2 分鐘而激活。Taq DNA 聚合酶是大腸桿菌重組表達的嗜熱細菌 Thermus aquaticus 來源的熱穩定型 DNA 聚合酶，分子量為 94 kDa。本酶經特殊改造，具有超強擴增能力和延伸速度，擴增片段的長度可達 5-6 kb，延伸速度為 2-3 kb/ min（72℃）。該酶具有 5’→3’聚合酶活性，較弱的 5’→3’外切酶活性；無 3’→5’ 外切酶活性。擴增產物具有 3'-dA 尾巴。
以大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物，在 72℃、30 min 內，將 10 nmole 脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個活性單位（U）。
濃度：5U/μl
保存條件：-20℃保存特點
? 經特殊改造，擴增能力強，2kb/min 延伸條件下可有效擴增 3-5kb 的 DNA 片段；
? 酶的熱穩定性有一定程度提高，可以采用 98 度 2 分鐘預變性；
? 可在 60-72 度下進行兩步法 PCR，縮短整個 PCR 時間。
? PCR 產物具有 3’-dA 尾巴，可直接用于 T/A 克隆；
? 可以摻入 dUTP、dITP、熒光標記核苷酸。適用范圍
? 熱啟動 PCR 擴增
? Multiplex PCR
? 菌落PCR
? TA 克隆 PCR 產物添加 3’-dA
? DNA 熒光標記產品包裝規格及組成
Component | AE0105A/ AE0106A* | AE0105B/ AE0106B* | AE0105C/ AE0106C* | AE0105D/ AE0106D* |
HS Taq DNA polymerase | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×Taq Buffer | 0.5 ml×1 | 1.0 ml×3 | 5.0 ml×2 | 5.0 ml×5 |
2 mM dNTPs | -/0.5 ml×1 | -/1.0 ml×3 | -/5.0 ml×2 | -/5.0 ml×5 |
*附帶 2mM dNTP 混合物。質量控制
相關測試表明無外源內切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR 方法檢測無宿主殘余 DNA。
室溫放置一周，擴增活性無明顯改變；但強烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20 度。酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween
20, and 50% glycerol.
注：以下反應舉例為 50 μl 標準PCR 體系， 僅供參考。實際 PCR 條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化，確定最佳反應條件。
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
HS Taq（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*DNA template 可參照如下標準（50 μl PCR 體系）：
人類基因組 DNA | 0.1 μg-1 μg |
λDNA | 0.5 ng-5 ng |
質粒 DNA | 0.01 ng-1 ng |
大腸桿菌 DNA | 10 ng-100 ng |
PCR 反應條件
95℃ | 5 min | |
95℃ | 15 sec | |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 30s/kb | |
72℃ | 3 min |
注意事項
l 本酶為熱啟動 Taq DNA 聚合酶，需 95 度加熱 5 分鐘或 98 度加熱 2 分鐘而激活；因此有利于提高擴增的特異性，減少非特異性擴增和引物二聚體，得到良好的PCR 結果。
l Taq DNA 聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性，因此在 PCR 產物 3’末端通常會加上 1 個多余的腺嘌呤。
l 對非熱啟動酶而言，建議在冰上配置 PCR 反應液后，再放入 PCR 儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性，減少非特異性擴增，得到良好的PCR 結果。
l 堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。Taq DNA 聚合酶的堿基錯誤率為 1×10-5。
l 如進行 PCR 擴增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議提高退火溫度，或進行梯度退火， 確定最佳退火溫度；同時可以適當減少體系中的 Taq 酶用量，以增加 PCR 擴增反應的特異性。
l 本公司 Buffer 經大量 PCR 反應實例優化而成，然而對某些PCR 反應存在一個最優的鎂離子濃度。若需要優化鎂離子濃度，請購買本公司不含鎂離子的 buffer 和 MgCl2/MgSO4。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
