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產品說明
8-氧代鳥嘌呤 DNA 糖基化酶（8-oxoguanine DNA glycosylase）也稱作甲酰胺嘧啶-DNA 糖基化酶（Formamidopyrimidine（fapy）-DNA glycosylase，Fpg），又稱為mutM蛋白。其既有 N-糖苷水解酶活性，也有 AP-裂解酶活性。N-糖苷水解酶活性可以切下雙鏈 DNA 上受損的嘌呤堿基，產生一個脫嘌呤（AP）位點。AP-裂解酶活性可以切割 AP 位點的 3′ 或 5′ 端，產生一個具有 3′ 和 5′ 磷酸的堿基缺口，除去 AP 位點。
被 Fpg 識別并切除的受損堿基包括：7,8-二羥基-8-氧代鳥嘌呤（8-氧代鳥嘌呤）、8-羥基腺嘌呤、fapy-鳥嘌呤、甲基-fapy-鳥嘌呤、fapy-腺嘌呤、黃曲霉毒素 B1-fapy-鳥嘌呤、5-羥基-胞嘧啶和 5-羥基尿嘧啶。
本公司Fpg是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1單位指在37℃條件下， 1小時內能夠切割 1 pmol 含單個與胞嘧啶配對的 8-氧代鳥嘌呤的 34 bp 寡核苷酸雙鏈所需要的酶量。
活性測定條件
1× AM Buffer A：10 mM Bis Tris 丙烷-HCl，10 mM MgCl2，1mM DTT（pH 7.0 @ 25℃）加入 100 μg/ml BSA，37℃ 溫育。
熱失活：60℃ 加熱 10 分鐘。
濃度：8U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與適用范圍
? 多種損傷堿基的去除
? 單細胞凝膠電泳（彗星試驗）
產品包裝規格及組成
Component | AE1105A | AE1105B |
Fpg | 500U | 2500U |
10× AM Buffer A | 0.2ml | 1.0ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris -HCl，50 mM NaCl，0.5mM EDTA，200μg/ml BSA，50% Glycerol，pH8.0@25℃
使用實例：
1、8-oxo-G雙鏈DNA的切割
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積或濃度 |
10×Buffer | 2ul |
底物：8-oxo-G雙鏈DNA | 1-4 pmole |
EcFpg (8U/μl) | 1ul |
H2O | 補水到20ul |
總體積 | 20ul |
2）37℃×30min反應，
3）變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測DNA切割效果，或按實驗目的進行后續操作。
2、損傷DNA的修復
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積或濃度 |
10×Buffer | 2ul |
底物：氧化損傷DNA | 100-200ng |
EcFpg (8U/μl) | 1-2ul |
H2O | 補水到20ul |
總體積 | 20ul |
2）37℃×30-60min反應，
3）按實驗目的進行后續操作，例如建庫測序或PCR擴增等。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
Fpg為雙功能DNA糖苷酶，終產物為具有 3′ 和 5′ 磷酸的單堿基缺口，而非AP 位點。
