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Trt DNA Polymerase with RT buffer
Trt DNA聚合酶是大腸桿菌重組表達的嗜熱細菌來源的熱穩定型DNA聚合酶,分子量為94 kDa。本酶經特殊改造,具有很強擴增能力和延伸速度,擴增片段的長度可達3-5 kb,延伸速度為1 -2kb/ min(72℃)。該酶具有5’→3’聚合酶活性,較弱的5’→3’外切酶活;無3’→5’外切酶活性。擴增產物具有3'-dA尾巴。另外在Mn2+離子存在下,Trt DNA聚合酶具有反轉錄活性,利用該特性,可用該酶在同一管中進行反轉錄反應與PCR反應(1步法RT-PCR)。
產品代碼 規格 價格 數量 購物車
AE0351A 250U ¥580
在線下單
AE0351B 250U×5 ¥2320
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AE0351C 1250U×4 ¥8120
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AE0351D 2500U×5 ¥17400
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產品說明

  Trt DNA聚合酶是大腸桿菌重組表達的嗜熱細菌來源的熱穩定型DNA聚合酶,分子量為94 kDa本酶經特殊改造,具有很強擴增能力和延伸速度,擴增片段的長度可達3-5 kb,延伸速度為1 -2kb/ min72。該酶具有5’→3’聚合酶活性,較弱的5’→3’外切酶活;無3’→5’外切酶活性。擴增產物具有3'-dA尾巴。另外在Mn2+離子存在下,Trt DNA聚合酶具有反轉錄活性,利用該特性,可用該酶在同一管中進行反轉錄反應與PCR反應(1步法RT-PCR)。

活性定義

   以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在7230 min內,將10 nmol脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量,定義為一個活性單位(U)。

濃度:2.5U/μl

保存條件:-20保存

特點

?  同時具有反轉錄酶活性與聚合酶活性,能夠用于RNA的一步法檢測

?  本酶經特殊改造,具有很強擴增能力和延伸速度,可在2kb/ min延伸條件下,有效擴增3-5kbDNA片段;

?  熱穩定性好:95下半衰期超過40 min

?  耐受dUTPdITP

?  PCR產物具有3’-dA尾巴,可直接用于T/A克隆。

適用范圍

?  常規PCR擴增;

?  菌落PCR

?  TA克隆PCR產物添加3’-dA

?  高溫反轉錄反應,降低RNA二級結構對RT的影響;

?  一步法RT-PCR。

產品包裝規格及組成

Component

AE0351A/

AE0352A*

AE0351B/

AE0352B*

AE0351C/

AE0352C*

AE0351D/

AE0352D*

Trt DNA polymerase

100U

500U

500U×4

1000U×5

10×Trt PCR Buffer

0.5 ml×1

1.0 ml×1

1.0 ml×4

1.0 ml×10

Trt RT-PCR Buffer#

0.5 ml×1

1.0 ml×1

1.0 ml×4

1.0 ml×10

2 mM dNTPs

-/0.2 ml×1

-/1.0 ml×1

-/1.0 ml×4

-/1.0 ml×10

*附帶2mM dNTP混合物。

#RT-PCR buffer專門為RT-PCR配制,實驗需使用DEPC處理ddH2O和無核酸酶A試劑與耗材。

質量控制

相關測試表明無外源內切酶或外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周,擴增活性無明顯改變;但強烈建議不要在室溫下長期放置,用畢放回-20度。

酶貯存緩沖液

10mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C), 300mM KCl, 1mM DTT,0.1mM EDTA, 0.5mg/ml BSA and 50% glycerol.

應用舉例

1.常規PCR

以下反應舉例為50 μl標準PCR體系, 僅供參考。實際PCR條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化,確定最佳反應條件。

PCR組份

體積/μl

終濃度

10×Trt PCR Buffer

5

dNTPs2.0 mM

5

0.2 mM

引物F10 μM

1.5

0.3 μM

引物R10 μM

1.5

0.3 μM

DNA Template

Varable*

/

Trt2.5U/μl

1.0

2.5U

ddH2O

Varable

/

總體積

50

/

*DNA template可參照如下標準50 μl PCR體系)

l  人類基因組DNA 

0.1 μg-1 μg

l  λDNA 

0.5 ng-5 ng

l  質粒DNA 

0.01 ng-1 ng

l  大腸桿菌DNA

10 ng-100 ng

常規PCR反應條件

95

5 min


95

15 sec


55~72

20 sec 

30 Cycles

72

1-2kb/min


72

3 min


 


 

2. RT-PCR

以下反應舉例為50 μl標準RT-PCR體系, 僅供參考。實際RT-PCR條件應根據RNA模板、引物、目的片段大小加以優化,確定最佳反應條件。

RT-PCR組份

體積/μl

終濃度

5×Trt RT-PCR Buffer

10

dNTPs2.0 mM

5

0.2 mM

引物F10 μM

1.5

0.3 μM

引物R10 μM

1.5

0.3 μM

RNA Template

Varable*

/

Trt2.5U/μl

1.0

2.5U

ddH2ODEPC處理)

Varable

/

總體積

50

/

RT-PCR反應條件

80

2 min


55

10 min 


95

5 min


95

30 sec


55~72

30 sec 

30 Cycles

72

1kb/min


72

3 min



 注意事項

l  Trt DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性,因此在PCR產物3’末端通常會加上1個多余的腺嘌呤。

l  建議在冰上配置PCR 反應液后,再放入PCR儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性,減少非特異性擴增,得到良好的PCR結果。

l  如進行PCR擴增后,除目的條帶外,還伴隨其他雜帶,建議適當減少體系中的酶用量,以增加PCR擴增反應的特異性。

l  本公司10×PCR Buffer經大量PCR反應實例優化而成,然而對某些PCR反應存在一個最優的鎂離子濃度。若需要優化鎂離子濃度,請購買本公司不含鎂離子的bufferMgCl2/MgSO4

l  反轉錄酶活性需要MnCl2才能夠高效合成cDNA,本公司RT-PCR Buffer經大量RT-PCR反應實例優化而成,然而對某些RT反應存在一個最優的錳離子濃度。若需要優化錳離子濃度,請購買本公司不含錳離子的5×RT-PCR bufferMnCl2/MnSO4

 

警告: 本產品僅限科研實驗使用,臨床應用安全性和有效性未鑒定,不可用于醫療臨床診斷。


Trt DNA Polymerase with RT buffer
Trt DNA Polymerase with RT buffer
Trt DNA聚合酶是大腸桿菌重組表達的嗜熱細菌來源的熱穩定型DNA聚合酶,分子量為94 kDa。本酶經特殊改造,具有很強擴增能力和延伸速度,擴增片段的長度可達3-5 kb,延伸速度為1 -2kb/ min(72℃)。該酶具有5’→3’聚合酶活性,較弱的5’→3’外切酶活;無3’→5’外切酶活性。擴增產物具有3'-dA尾巴。另外在Mn2+離子存在下,Trt DNA聚合酶具有反轉錄活性,利用該特性,可用該酶在同一管中進行反轉錄反應與PCR反應(1步法RT-PCR)。
250U
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