咨詢熱線：
400-660-9586
產品說明
RNase A是一種RNA特異性的核酸內切酶，分子量13.7kDa，含有4對二硫鍵。特異性在尿嘧啶和胞嘧啶的３’磷酸處切斷磷酸二酯鍵，特異攻擊 RNA 上嘧啶核苷酸的C′3上的磷酸根和相鄰核苷酸的C′5之間的鍵，產物為3′嘧啶單核苷酸或以3′嘧啶核苷酸結尾的低聚核苷酸。不水解嘌呤堿基3’端的磷酸二酯鍵。RNase A等電點為pH9.6，是一種堿性蛋白質，最適反應溫度為60度，一般用于在20-70度消化各種單鏈RNA分子。單鏈RNA是優勢底物，雙鏈RNA的切割活性很低。鉀鹽和鈉鹽對RNase A的活性有促進作用。RNase A主要用于除去樣品中的RNA污染，例如去除質粒DNA和基因組DNA抽提物中的RNA。另外，可除去 DNA:RNA或RNA:RNA雜合體中未雜交的 RNA區；可用來確定 DNA 或 RNA 中單堿基突變的位置, 用標記了的RNA探針與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火，RNA：RNA或RNA：DNA中的錯配堿基可被RNase A切割。
本公司牛胰RNase A來源于牛胰腺，多不純化而得。不含其它核酸酶、蛋白酶和 DNA。
活性定義
1活性單位指在100 mM Tris-acetate (pH 6.5), 1 mM EDTA, 1 mM cyclic 2', 3'-CMP反應體系中，1ml反應體積下，37℃反應1 min使286nm下的吸收值增高0.0146所需的酶量。1U等價于0.1177 Kunitz 單位。
活性測定條件
100 mM Tris-acetate (pH 6.5), 1 mM EDTA, and 1 mM cyclic 2', 3'-CMP反應體系，1ml反應體積，37℃反應。
濃度：10mg/ml
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與應用
? 不含其他核酸酶和蛋白酶
? DNA和蛋白樣品中RNA的去除。
產品包裝規格及組成
Component | AE2281A | AE2281B |
RNase A | 10mg | 50mg |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
10mM Tris·HCl (pH7.5)，15mM NaCl，50%甘油
使用實例：
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積或濃度 |
小抽質粒或基因組DNA | 50 ul |
牛胰RNase A (0.1mg/ml) | 1-2 ul |
2）37-60℃×60min反應，
3）瓊脂糖電泳檢測酶切效果，或按實驗目的進行后續操作。
2、質粒抽提實驗去除RNA分子
1）RNase A的加入
方法1）：直接在溶液III中加入2-5mg RNase A
方法2）：在加入溶液III中和溶液II的溶液中，加入10ul RNase A
2）冰上或常溫放置8-15分鐘，消化溶液中的RNA分子
3）進行下一步質粒抽提操作。
3、其它需要消化RNA的實驗
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積或濃度 |
實驗樣品 | 50ul |
RNase A(0.1-1mg/ml) | 1-2ul |
2）37-60℃×60min反應，
3）瓊脂糖電泳檢測酶切效果，或按實驗目的進行后續操作。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l RNase高度選擇性消化單鏈RNA
l 存在二級結構的rRNA或雙鏈RNA需要提高反應溫度
l 可以添加2M尿素消除RNA二級結構，提高消化效率
