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產品說明
核酸內切酶V也稱為脫氧次黃嘌呤3′內切酶，是一種DNA 修復酶，識別DNA中的脫氧次黃嘌呤（dI）堿基的雙鏈（無論配對與否）或單鏈DNA，即腺嘌呤的脫氨基產物，并在dI的3’端的第一、二個磷酸二酯鍵切斷DNA鏈，產生一個3′ 羥基、5′ 磷酸的切口。也可識別RNA中的次黃嘌呤堿基I，并在I堿基下游第一、二個磷酸二酯鍵切斷RNA鏈。也可識別含脫堿基（AP）位點或尿素、堿基錯配、插入/缺失錯配、發夾結構、未配對 loop 環、折疊 flaps 和類-Y 型結構的DNA，但是識別后者的能力不如前者。最新報導表明內切核酸酶V還可以識別RNA中的次黃嘌呤堿基（I），并主要在I堿基3’端的第二個磷酸二酯鍵切斷RNA鏈。本公司耐熱內切核酸酶V來自嗜高溫微生物。
本公司耐熱內切核酸酶V是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1單位指在溫度為55℃，1×內切核酸酶V應緩沖體系的條件下，60 min內切割 1 pmol 含單一脫氧次黃嘌呤核苷位點的34 bp寡核苷酸雙鏈所需的酶量。
活性測定條件
AM Buffer D，55℃ 溫育。
含脫氧次黃嘌呤底物的制備：合成中間摻入了脫氧次黃嘌呤（dI）堿基的34 nt寡核苷酸單鏈，與互補單鏈（與dI配對堿基為T）退火配成雙鏈寡核苷酸。
濃度：10U/μl
保存條件：-20℃保存
特點
? 高溫酶，在30-85℃均有活性
? 熱失活：加入終濃度0.2N的NaOH，95℃ 加熱5min。或酚氯仿抽提。
適用范圍
? 切割含脫氧次黃嘌呤堿基的DNA寡核苷酸
? 切割含次黃嘌呤堿基的RNA寡核苷酸
? 錯配堿基對的切割 ，但結合力與切割活性很弱（相比次黃嘌呤堿基）
產品包裝規格及組成
Component | AE1165A | AE1165B |
Thermostable 內切核酸酶 V | 200U | 1kU |
10× AM Buffer D | 0.2ml | 1.0ml |
質量控制
相關測試表明無外源內切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，200 μg/ml BSA ，0.15% Triton? X-100，50% Glycerol ，pH 8 @ 25°C。
應用舉例
切斷單鏈或雙鏈DNA中dI堿基下游的磷酸二酯鍵
1) 按如下表格配制反應液
反應組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Buffer | 2 | 1× |
含I堿基的單鏈或雙鏈DNA | 1-2 | 5pmole |
高溫內切核酸酶V（10U/μl） | 1.0 | 10U |
ddH2O | Variable | / |
總體積 | 20 | / |
2) 55-65°C反應30-60min。
3) 8M尿素變性PAGE電泳檢測切割效果
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 內切酶V在AM buffer A、B、D2中具有100%活性，在AM buffer C中只有75%活性。
l 熱堿處理失活酶的情況下，若堿影響下游實驗，需要加入等量的HCl對堿進行中和。
