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產品說明
無機焦磷酸酶（釀酒酵母，Saccharomyces cerevisiae）催化無機焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽：P207–4 + H20 →2HP04–2。焦磷酸水解酶在核酸擴增實驗中，其可解除生成的無機焦磷酸鹽對反應體系的抑制，提高RNA和DNA的合成產量。
本公司酵母無機焦磷酸酶是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在20℃下， 1×無機焦磷酸酶反應緩沖體系下，1 min催化無機焦磷酸鹽生成1μmol磷酸鹽所需的酶量。
活性測定條件
1× Buffer：20 mM Tris-HCl，pH 7.5，2 mM MgCl2 and 2 mM PPi，
濃度：0.2U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與適用范圍
? 提高體外轉錄反應中RNA產量
? 增強DNA復制能力
產品包裝規格及組成
Component | AE0905A | AE0905B |
酵母無機焦磷酸酶 | 10U | 100U |
10×Yeast PPase Buffer | 0.3ml | 1.5ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl，100 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 8.0 @ 25°C
使用實例1：水解無機焦磷酸
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積或濃度 |
10×Buffer | 10ul |
焦磷酸鈉 | 2mM |
酵母無機焦磷酸酶(0.2U/μl) | 2-5ul |
H2O | Xul |
總體積 | 100ul |
2）25℃×10min反應，
3）20μl 0.1mM 檸檬酸終止反應，
4）按實驗目的進行后續操作。
使用實例2：增加體外轉錄RNA合成量
1）按如下表格配制體外RNA轉錄反應液
反應組分 | ul |
10× Buffer | 5 |
NTP（10mM ATP,GTP,TTP,CTP） | 5 |
模板DNA | 1μg |
RNase Inhibitor （40U/μl） | 1 |
T7 RNA polymerase (50U/μl) | 1 |
酵母無機焦磷酸酶(0.2U/μl) | 1.0-2.0 |
DEPC-treated H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2）按設定條件進行體外轉錄，結束后瓊脂糖膠電泳檢測RNA轉錄產物
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 該酶在多種反應Buffer中均具有活性，通常該酶在RPA擴增、RNA體外轉錄等實驗中，可直接加入酶即可。
l 該酶的用量在不同的實驗中需要優化，通常在0.05~1U/ml濃度調整。
l 該酶的最佳反應溫度為25℃，其在16~37℃均有活性，65℃ 10min可使該酶失活，因此不適合于Bst DNA聚合酶催化的LAMP擴增。
