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產(chǎn)品說明
無機(jī)焦磷酸酶（PPase）催化無機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽：P207–4 + H20 → 2HP04–2 。主要用于降解核酸合成反應(yīng)體系中的副產(chǎn)物焦磷酸，從而解除對核酸合成反應(yīng)的抑制作用，增加合成產(chǎn)量。本酶為熱穩(wěn)定酶，在50-70℃均有較高活性，尤其適合于Bst DNA聚合酶催化的LAMP等溫?cái)U(kuò)增實(shí)驗(yàn)。
本公司熱穩(wěn)定無機(jī)焦磷酸酶是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1 單位指標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下65℃ 反應(yīng) 10 分鐘，每分鐘催化無機(jī)焦磷酸鹽生成 1 μmol 磷酸鹽的酶量。
活性測定條件
1×反應(yīng)體系：50mM Tris-HCl，1 mM MgCl2 和 0.32 mM PPi，pH 8.5，
濃度：1U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復(fù)凍融
特點(diǎn)
? 本酶為熱穩(wěn)定酶，尤其適合于Bst DNA聚合酶催化的LAMP、CPA等溫?cái)U(kuò)增，以及HDA等溫?cái)U(kuò)增實(shí)驗(yàn)。
? 本酶可以用于PCR擴(kuò)增反應(yīng)
適用范圍
? 增加PCR、等溫核酸擴(kuò)增反應(yīng)的DNA合成產(chǎn)量
? 用于LAMP、RPA、HDA等溫核酸擴(kuò)增，增加擴(kuò)增產(chǎn)量
? 提高體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RNA產(chǎn)量
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE0903A | AE0903B |
熱穩(wěn)定無機(jī)焦磷酸酶 | 200U | 1000U |
10×熱穩(wěn)定PPase Buffer | 1.0ml | 1.0ml×5 |
質(zhì)量控制
經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測，確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl，100 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 8 @ 25°C
使用實(shí)例1：水解無機(jī)焦磷酸
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積或濃度 |
10×Buffer | 10ul |
焦磷酸鈉 | 2mM |
酶(1U/μl) | 2-5ul |
H2O | Xul |
總體積 | 100ul |
2）65℃×10min反應(yīng)，
3）20ul 0.1mM 檸檬酸終止反應(yīng)，
4）按實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行后續(xù)操作。
使用實(shí)例2：改善PCR擴(kuò)增效果
1） 按如下表格配制PCR反應(yīng)液
PCR 組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq酶Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
Taq DNA聚合酶（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
熱穩(wěn)定無機(jī)焦磷酸酶（1U/μl） | 1.0-2.0 | 1-2U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
2）按設(shè)定PCR條件進(jìn)行PCR，結(jié)束后瓊脂糖膠電泳檢測PCR產(chǎn)物。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項(xiàng)
l 因體外RNA合成反應(yīng)、RPA等溫?cái)U(kuò)增、NASBA等溫?cái)U(kuò)增都是在常溫下進(jìn)行，因此本酶不建議應(yīng)用于這3種反應(yīng)。
l 本無機(jī)焦磷酸酶在任何含有Mg2+（1-10 mM）的緩沖液中都能很好地發(fā)揮作用。
