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產(chǎn)品說明
核酸內(nèi)切酶 V 是在 E. coli 中發(fā)現(xiàn)的一種 DNA 修復(fù)酶，大小為24.9 kDa。它識(shí)別 DNA 中的脫氧次黃嘌呤堿基，即腺嘌呤的脫氨基產(chǎn)物。核酸內(nèi)切酶 V，也稱為脫氧次黃嘌呤 3′ 內(nèi)切酶，識(shí)別含脫氧次黃嘌呤（無論配對(duì)與否）的雙鏈或單鏈 DNA。也可識(shí)別含脫堿基（AP）位點(diǎn)或尿素、堿基錯(cuò)配、插入/缺失錯(cuò)配、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、未配對(duì) loop 環(huán)、折疊 flaps 和類 -Y 型結(jié)構(gòu)的 DNA，但是識(shí)別后者的能力不如前者。普遍認(rèn)為核酸內(nèi)切酶V發(fā)揮DNA修復(fù)功能時(shí)，還需另外一種蛋白的存在，因?yàn)樗荒芮谐?DNA 上的脫氧次黃嘌呤堿基或受損堿基。最新報(bào)導(dǎo)表明內(nèi)切核酸酶V還可以識(shí)別RNA中的次黃嘌呤堿基（I），并主要在I堿基3’端的第二個(gè)磷酸二酯鍵切斷RNA鏈。
核酸內(nèi)切酶V對(duì)脫氧次黃嘌呤堿基 3′ 端第一、二個(gè)磷酸二酯鍵進(jìn)行切割，產(chǎn)生一個(gè) 3′ 羥基、5′ 磷酸的切刻，第一個(gè)磷酸二酯鍵的切割比例為第二個(gè)的約10%。
本公司內(nèi)切核酸酶V是在大腸桿菌中重組表達(dá)，并親和純化的重組大腸桿菌內(nèi)切核酸酶V。
活性定義
1單位指在溫度為37℃反應(yīng)條件下，60min內(nèi)能切割 1 pmol 含單脫氧次黃嘌呤堿基位點(diǎn)的34 mer寡核苷酸雙鏈所需的酶量。
活性測定條件
1×AM Buffer D：50 mM Potassium Acetate，20 mM Tris-acetate，10 mM Magnesium Acetate，1 mM DTT (pH 7.9 @ 25°C)
脫氧次黃嘌呤核苷位點(diǎn)的制備：合成34 mer寡核苷酸雙鏈時(shí)，在其一條鏈的中間摻入脫氧次黃嘌呤堿基（dI）。
濃度：10U/μl
保存條件：-20℃保存
特點(diǎn)
? 熱失活：65℃ 加熱20min。
適用范圍
? 切割含脫氧次黃嘌呤堿基的DNA和RNA寡核苷酸
? 切割錯(cuò)配堿基對(duì)DNA，活性很弱
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE1161A | AE1161B |
內(nèi)切核酸酶V | 200U | 1kU |
10×AM Buffer D | 0.2ml | 1ml |
質(zhì)量控制
相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，200 μg/ml BSA ，0.15% Triton? X-100，50% Glycerol ，pH 8 @ 25°C。
應(yīng)用舉例
切斷單鏈或雙鏈DNA中dI堿基下游的磷酸二酯鍵
按如下表格配制反應(yīng)液
反應(yīng)組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Buffer | 2 | 1× |
含I堿基的單鏈或雙鏈DNA | 1-2 | 5pmole |
高溫內(nèi)切核酸酶V（10U/μl） | 1.0 | 10U |
ddH2O | Variable | / |
總體積 | 20 | / |
37°C反應(yīng)30-60min。
75°C加熱15分鐘，失活酶。
8M尿素變性PAGE電泳檢測切割效果。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項(xiàng)
l 內(nèi)切酶V在AM Buffer A、B、D中具有完全活性，在AM Buffer C中只有75%的活性。
