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產品說明
本酶具有從 3′ →5′方向水解單鏈 DNA 的外切酶活性。在進行Sanger DNA測序或SNP分析之前，在PCR反應中去除單鏈引物，去除用于巢式PCR反應的單鏈引物，去除線性單鏈DNA，在樣品中留下雙鏈DNA。
本公司Exonuclease I是重組表達，并多步純化的重組大腸桿菌exonuclease I，分子量為51 kDa。
活性定義
1 單位指在 37℃ 條件下，30 分鐘內催化釋放 10 nmol 的酸溶性核苷釋放所需要的酶量。
活性測定條件
1×反應Buffer：67 mM Glycine-KOH（pH 9.5 @ 25℃，6.7 mM MgCl2，10 mM 2- β-ME
濃度：20 U/ul
保存條件：-20℃保存
特點
? ssDNA特異性3’外切核酸酶；
? 熱失活：80℃ 加熱 20 分鐘。
適用范圍
? 3′單鏈DNA去除反應，保留dsDNA；
? PCR 擴增后降解引物；
? 巢式PCR 擴增后降解引物；
? 其它需要降解ssDNA的實驗。
產品包裝規格及組成
Component | AE2202A | AE2202B |
Exonuclease I | 1000U | 5000U |
Exonuclease I Buffer | 0.3ml | 1.5ml |
質量控制
相關測試表明無外源內切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，5 mM β-ME，0.5 mM EDTA，100 μg/ml BSA，50% Glycerol，pH 7.5 @ 25°C。
相關產品
AE2201：EcRecJ核酸酶（5' to 3’），AE2206：耐熱RecJ nuclease（3' to 5’）
應用實例
1.去除PCR產物中的引物
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 5 |
PCR產物 | 40 |
Exonuclease I (20U/μl) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 37°C反應30min；
3) 80°C加熱20min，使酶失活。
4) 進行后續實驗
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 不適合5’單鏈DNA的去除，如需去除5’單鏈DNA請選用本公司RecJ核酸酶產品（AE2201）。
