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產(chǎn)品說明
T5 核酸外切酶沿 5′ →3′ 方向降解 DNA。它既能從 5′ 末端起始消化，也能從線性或環(huán)狀雙鏈 DNA 的切刻或缺口處起始消化。但不能降解超螺旋雙鏈 DNA，T5 核酸外切酶還具有單鏈 DNA 核酸內(nèi)切酶活性。
本公司T5 核酸外切酶是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1單位指在溫度為37℃，1× T5 核酸外切酶反應(yīng)緩沖體系的反應(yīng)條件下，30min內(nèi)水解雙鏈DNA底物產(chǎn)生1nmol 酸可溶性脫氧核糖核苷酸所需的酶量。
活性測定條件
AM Buffer D，37℃ 溫育。
濃度：10U/μl
保存條件：-20℃保存
特點
? 雙鏈DNA特異性核酸外切酶和單鏈DNA內(nèi)切酶
? 起始于線形或缺口雙鏈DNA的5'末端
? 在5'到3'方向切割線性或缺口雙鏈DNA
適用范圍
? 環(huán)狀雙鏈DNA不完全連接產(chǎn)物的去除
? 堿性質(zhì)粒中變性DNA的降解改進DNA克隆的純化方法
? 質(zhì)粒樣品中污染線狀和缺口DNA的降解，同時保持超螺旋質(zhì)粒DNA。
? 去除堿裂解質(zhì)粒純化過程中分離的變性DNA。
? 從質(zhì)粒cDNA文庫中提高小肽的轉(zhuǎn)染效率
? 應(yīng)用于 Gibson 組裝方法
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE2106A | AE2106B |
T5 核酸外切酶 | 1kU | 5kU |
10× T5核酸外切酶Buffer | 0.5ml | 1.5ml × 2 |
質(zhì)量控制
相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，0.1% Triton? X-100，50% Glycerol ，pH 7.5 @ 25°C。
注意事項
l T5 Exonuclease 不能切割硫代磷酸酯鍵。可以通過引入一個 α-硫代磷酸核苷酸將DNA分子的一端保護起來，進行單向切割。
相關(guān)產(chǎn)品
AE2105: T7 核酸外切酶
應(yīng)用實例
1. 酶切反應(yīng)
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 5 |
DNA | 100ng-1ug |
T5 核酸外切酶(10U/μl) | 1 |
H2O | Variable |
總體積 | 50 |
2) 37°C反應(yīng)30min；
3) 65℃加熱15min，或加入EDTA至總濃度為10mM，終止反應(yīng)；
4) 電泳檢測DNA水解結(jié)果。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實驗使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項
l T5 Exonuclease 不能切割硫代磷酸酯鍵。可以通過引入一個 α-硫代磷酸核苷酸將DNA分子的一端保護起來，進行單向切割。
