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產品說明
mRNA Cap 2'-O- Methyltransferase能在 RNA緊鄰 5′ 末端帽結構的第一個核苷酸的 2′ -OH上添加甲基基團。利用 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作為甲基供體，使帶帽 RNA的cap-O甲基化為 Cap-1。研究表明Cap-1結構的2’-O-甲基化可以使mRNA逃逸某些真核細胞的免疫反應。
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase只能將5’末端帶有m7GpppN 帽結構的RNA進行甲基化修飾，不能夠將5’端為pN, ppN, pppN or GpppN的RNA甲基化. m7GpppN 帽結構的RNA可以通過在體外轉錄反應中添加帽類似物，或體外加冒系統添加帽結構。2kU的mRNA Cap 2'-O- Methyltransferase可以甲基化400 μg的帶帽 RNA.
本公司mRNA Cap 2'-0- Methyltransferase是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在37℃下， 1×mRNA Cap 2'-0- Methyltransferase反應緩沖體系下，60 min內將10 pmol 80 nt 的帶帽 RNA 轉錄子甲基化所需的酶量。
活性測定條件
50 mM Tris-HCl (pH 8.0)，5 mM KCl，1 mM DTT，1 mM MgCl2，37℃ 溫育。
濃度：50U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與用途
? 改善 mRNA 在顯微注射和轉染后的表達
? 提高 RNA 的翻譯效率
產品包裝規格及組成
Component | AE0908A | AE0908B |
mRNA Cap 2'-0- MTase | 2kU | 10kU |
mRNA Cap 2'-0- MTase Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
DEPC處理H2O | 1.0ml | 5.0ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1% (w/v) Triton? X-100, 50% Glycerol, pH 8 @ 25°C
使用實例：
1）按下表配制反應體系(可以甲基化10 μg的5’帶帽RNA)
反應組分 | 體積或濃度 |
10×Buffer | 2 μl |
2'-O- Methyltransferase (50U/μl) | 1 μl |
核酸酶抑制劑（40U/ul） | 0.5 μl |
變性的Cap 2'-OH mRNA# | X μl |
SAM (4 mM) | 1 μl |
DEPC處理H2O | Y μl |
總體積 | 20 μl |
2）37℃×60min反應，
3）75℃×15min失活酶，
4）按實驗目的進行后續操作。
注意事項：
1、變性Cap 2'-OH mRNA的制備方法如下：
1) 將5’帽狀結構RNA溶于無核酸酶的去離子水，總體積16 ul；
2) 65度加熱5min；
3) 冰上放置5min。
2、長度短于200nt的RNA，建議反應時間延長到2小時。
3、如后續試驗需要，可以對甲基化的RNA進行純化。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 只能甲基化帶5’ m7GpppN帽結構的RNA
l 可以在反應體系中加入核酸酶抑制劑來防止RNA的降解
l 為了提高2’-O-甲基化RNA的后續應用效果，可以對甲基化修飾的RNA進行純化。
