產品說明
熱穩定 Flap 核酸內切酶 1 (FEN1) 催化切除雙鏈核酸中分叉的DNA和RNA flap 結構,產生 5′ 磷酸末端。在體內,FEN1 是岡崎片段加工成熟的基本元件,并參與堿基切除修復過程。
本公司Thermostable FEN1是重組表達,并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1 單位指在65℃ 條件下,10 分鐘內切割 10 pmol 含 5′ flap 結構(20nt flap)的寡核苷酸底物所需要的酶量。
活性測定條件
1×AM Buffer E:20 mM Tris-HCl,10 mM (NH4)2SO4,10 mM KCl,10 mM MgSO4,0.1% Triton X-100 (pH 8.8 @ 25℃),65℃溫育。
濃度:32U/ul
保存條件:-20℃可保存2年,避免反復凍融
特點與應用
? 切除 DNA flap、RNA flap結構;
? 熱穩定酶,95度溫育30分鐘剩余活性大于90%。
產品包裝規格及組成
Component | AE2402A | AE2402B |
Thermostable FEN1 | 1600U | 8000U |
0.2ml | 1.0ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測,確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl,1 mM DTT,100 mM KCl,0.1 mM EDTA,0.1% Triton? X-100,50% Glycerol,pH 7.4 @ 25°C
1. 酶切反應
1)按下表配制反應體系
反應組分 | ul |
10×AM Buffer E | 2 |
底物:5’Flap結構的DNA或RNA | 5-50pmole |
Thermostable FEN1 (32U/μl) | 1-2 |
H2O | Variable |
總體積 | 20 |
2)50-70°C溫育15-30min
3)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測酶切產物。
警告: 本產品僅限科研實驗使用,臨床應用安全性和有效性未鑒定,不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 不能熱失活,可以通過加入蛋白酶K消化失活,或酚氯仿抽提失活。