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本酶催化3′→5′磷酸二酯鍵的形成，使核苷酸的5′-磷酸末端和 3′-羥基末端連接，伴隨著 ATP 水解為AMP和PPi。作用底物包括單鏈RNA、DNA及二核苷焦磷酸。
本公司T4 RNA連接酶1是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在37℃下，1× T4 RNA連接酶反應(yīng)緩沖體系下，30 min內(nèi)將1 nmol的5′-[32P] rA16轉(zhuǎn)化成磷酸鹽不溶物所需的酶量。
活性測(cè)定條件
50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl2，1 mM DTT，加入1 mM ATP，37℃溫育。
濃度：10U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復(fù)凍融
特點(diǎn)與適用范圍
? 連接單鏈RNA和DNA
? 用5′-[32P] pCp進(jìn)行RNA 3′末端標(biāo)記
? RNA和DNA分子內(nèi)及分子間的連接
? 合成單鏈寡脫氧核苷酸
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE1351A | AE1351B |
T4 RNA連接酶1 | 1000U | 5000U |
10× T4 RNA連接酶1 Buffer | 0.3ml | 1.5ml |
10 mM ATP | 0.3ml | 1.5ml |
50% PEG8000 | 0.3ml | 1.5ml |
質(zhì)量控制
經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)，無(wú)單鏈DNA核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶、RNase和磷酸酶污染。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.4 @ 25°C
使用實(shí)例：
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積或濃度 |
10×Buffer | 2ul |
底物 | Xul |
10 mM ATP | 2 |
酶(10 U/μl) | 1-2ul |
H2O | Yul |
總體積 | 20ul |
2）37℃×30min反應(yīng)，
3）65℃×15min失活酶，
4）尿素變性PAGE電泳檢測(cè)酶切產(chǎn)物，或按實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行后續(xù)操作。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
注意事項(xiàng)
l pCp的連接需要加入終濃度為10%（v/v）的DMSO。
l 熱失活：65℃×15min或煮沸2min
