咨詢熱線：
400-660-9586
產(chǎn)品說(shuō)明
本酶具有以ATP作為輔因子，連接與同一互補(bǔ)DNA鏈雜交的相鄰寡核苷酸鏈的5′磷酸末端和3′羥基末端從而形成磷酸二酯鍵的連接酶活性，且必須同時(shí)滿足兩條寡核苷酸與互補(bǔ)DNA鏈完全配對(duì)和兩鏈之前沒有間隙（gap）的條件才能反應(yīng)。本酶耐熱性好，在45-70℃區(qū)間內(nèi)均有活性。
本公司9°N DNA ligase是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1 單位指在溫度為45℃，1× 9°N DNA ligase Buffer緩沖體系的反應(yīng)條件下，15min內(nèi)能連接50%的被BstEII消化的 1ug λ DNA片段（約相當(dāng)于0.036pmole 12 bp 粘性末端）所需的酶量，粘性末端活性單位相當(dāng)于切刻封閉單位。
活性測(cè)定條件
10 mM Tris-HCl ，600 μM ATP，2.5 mM MgCl2，2.5 mM DTT，0.1% Triton X-100 (pH 7.5 @ 25℃)，45℃ 溫育。
濃度：40U/μl
保存條件：-20℃保存
特點(diǎn)
? 耐熱性好，兼容 連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ligase chain reaction, LCR）模板預(yù)變性步驟；
? 忠實(shí)性極高，缺口處錯(cuò)配堿基對(duì)不會(huì)被連接
? 可在高溫條件下連接DNA鏈上的切刻位點(diǎn)。
? 與常溫 DNA 連接酶相比，具有更高的連接特異性和較低的非特異性背景。
? 與 Taq DNA 連接酶相比，具有更高的連接特異性和較低的非特異性背景。
? 反應(yīng)溫度范圍為 35-70度，高溫下特異性和活性增強(qiáng)，反應(yīng)溫度可接近 80℃。
適用范圍
? 通過連接酶檢測(cè)反應(yīng)（LDR）和連接酶鏈?zhǔn)剑?/span>LCR）反應(yīng)，檢測(cè)等位基因特異性
? 連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（LCR）中連接磷酸化寡核苷酸
? 高溫下連接 DNA 鏈上的切刻位點(diǎn)
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | AE1310A | AE1310B |
9°N DNA連接酶 | 2000U | 10000U |
10× 9°N DNA Ligase Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
質(zhì)量控制
相關(guān)測(cè)試表明無(wú)外源內(nèi)切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，200 μg/ml BSA，50% Glycerol，10 mM (NH4)2SO4，pH 7.4 @ 25°C。
注意事項(xiàng)
l 本產(chǎn)品需要輔助因子ATP參與反應(yīng)
l 本產(chǎn)品可有效連接 12 bp 的互補(bǔ)片段，但無(wú)法連接 4 bp 的互補(bǔ)片段（典型限制酶消化產(chǎn)物）。
l 本產(chǎn)品不能替代T4 DNA ligase（目錄號(hào)AE1301）
相關(guān)產(chǎn)品
AE1308: Taq DNA ligase；AE1307: Pfu DNA ligase；
應(yīng)用實(shí)例
1. 連接反應(yīng)
1）按下表配制反應(yīng)體系
反應(yīng)組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 2 |
底物：互補(bǔ)粘性末端>8nt的DNA | 100ng-1μg |
9°N DNA ligase (40U/μl) | 1-2 |
H2O | Variable |
總體積 | 20 |
2）45-50°C連接15min
3）對(duì)于較長(zhǎng)的雙鏈DNA底物，瓊脂糖電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物；對(duì)于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物。
警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
