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產品說明
本酶具有以ATP作為輔因子，連接與同一互補DNA鏈雜交的相鄰寡核苷酸鏈的5′磷酸末端和3′羥基末端從而形成磷酸二酯鍵的連接酶活性，且必須同時滿足兩條寡核苷酸與互補DNA鏈完全配對和兩鏈之前沒有間隙（gap）的條件才能反應。本酶耐熱性好，在45-70℃區間內均有活性。
本公司高保真DNA ligase是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1 單位指在溫度為45℃，1× 高保真DNA ligase Buffer緩沖體系的反應條件下，15min內能連接50%的被BstEII消化的 1ug λ DNA片段（約相當于0.036pmole 12 bp 粘性末端）所需的酶量，粘性末端活性單位相當于切刻封閉單位。
活性測定條件
10 mM Tris-HCl ，600 μM ATP，2.5 mM MgCl2，2.5 mM DTT，0.1% Triton X-100 (pH 7.5 @ 25℃)，45℃ 溫育。
濃度：40U/μl
保存條件：-20℃保存
特點
? 耐熱性好，兼容 連接酶鏈式反應（ligase chain reaction, LCR）模板預變性步驟；
? 忠實性極高，缺口處錯配堿基對不會被連接
? 可在高溫條件下連接DNA鏈上的切刻位點。
? 與常溫 DNA 連接酶相比，具有更高的連接特異性和較低的非特異性背景。
? 與 Taq DNA 連接酶相比，具有更高的連接特異性和較低的非特異性背景。
? 反應溫度范圍為 35-70度，高溫下特異性和活性增強，反應溫度可接近 80℃。
適用范圍
? 通過連接酶檢測反應（LDR）和連接酶鏈式（LCR）反應，檢測等位基因特異性
? 連接酶鏈式反應（LCR）中連接磷酸化寡核苷酸
? 高溫下連接 DNA 鏈上的切刻位點
產品包裝規格及組成
Component | AE1310A | AE1310B |
高保真 DNA ligase | 2000U | 10000U |
10×高保真DNA ligase Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
質量控制
相關測試表明無外源內切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，200 μg/ml BSA，50% Glycerol，10 mM (NH4)2SO4，pH 7.4 @ 25°C。
相關產品
AE1308: Taq DNA ligase；AE1307: Pfu DNA ligase；
應用實例
1. 連接反應
1）按下表配制反應體系
反應組分 | 體積/ul |
10× Buffer | 2 |
底物：互補粘性末端>8nt的DNA | 100ng-1μg |
高保真 DNA ligase(40U/μl) | 1-2 |
H2O | Variable |
總體積 | 20 |
3）對于較長的雙鏈DNA底物，瓊脂糖電泳檢測連接產物；對于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測連接產物。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l 本產品需要輔助因子ATP參與反應
l 本產品可有效連接 12 bp 的互補片段，但無法連接 4 bp 的互補片段（典型限制酶消化產物）。
l 本產品不能替代T4 DNA ligase（目錄號AE1301）
