產(chǎn)品說明

DNA 連接酶催化雙鏈 DNA 中 5’-磷基和 3’-羥基之間形成磷酸二酯鍵的 DNA 連接酶，以 NAD⁺ 為輔酶，作為反應(yīng)的能量來源。只有當(dāng)寡核苷酸與互補(bǔ)的靶 DNA 完美配對(duì)，并且它們之間沒有間隙時(shí)，才會(huì)發(fā)生連接。對(duì)單鏈 DNA 或 RNA 和平末端 DNA 不具有活性。因此，可以檢測(cè)單堿基突變。高熱穩(wěn)定性允許用高密度雜交條件進(jìn)行連接，在高特異性和嚴(yán)格性下進(jìn)行 SNPs 的精準(zhǔn)檢測(cè)。

本公司Tth DNA Ligase是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。

活性定義

在 20 μl 反應(yīng)體系中，45℃ 條件下，15 分鐘內(nèi)能使 50% 的 1 μg 經(jīng) BstEII 消化的 λ DNA 片段

（12 bp 粘性末端，相當(dāng)于 0.0338pmole）發(fā)生連接所需要的酶量定義為 1 個(gè)活性單位。

活性測(cè)定條件

20 mM Tris-HCl(pH 7.6) , 25 mM Potassium Acetate , 10 mM Magnesium Acetate , 1 mM NAD+, 10 mM DTT , 0.1% TritonX-10，45℃反應(yīng)。

濃度：40U/μl

保存條件：-20℃。

特點(diǎn)

?  耐熱性好；

?  可在高溫條件下連接DNA鏈上的切刻位點(diǎn)。

應(yīng)用范圍：

?   連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ligase chain reaction, LCR）反應(yīng)中連接磷酸化寡核苷酸

?   連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)等位基因特異性

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

質(zhì)量控制

經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)，確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 50%(v/v) glycerol.

相關(guān)產(chǎn)品

AE1308: Taq DNA ligase，AE1310: 9°N DNA ligase，AE1307: Pfu DNA ligase

應(yīng)用實(shí)例

1. DNA連接反應(yīng)

1）按下表配制反應(yīng)體系

2) 45°C連接15min

3）對(duì)于較長(zhǎng)的雙鏈DNA底物，瓊脂糖電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物；對(duì)于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物。

警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。

注意事項(xiàng)

l  Taq DNA Ligase 不能代替 T4 DNA Ligase，本公司有售T4 DNA連接酶（AE1301）

l  長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存（>30 天），請(qǐng)存放在-80°C。

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