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產品說明
產品說明
在相鄰DNA鏈的5′-磷酸末端和3′-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該DNA連接反應只有當兩條寡核苷酸鏈與互補靶DNA完全配對，并且兩條寡核苷酸鏈之間沒有空隙的條件下才可發生。對單鏈 DNA 或 RNA 和平末端 DNA 不具有活性。因此，可以用它來檢測單堿基突變。Taq DNA 連接酶以NAD+為輔因子。在37-75℃范圍內，Taq DNA連接酶均有活性。。高熱穩定性允許用高密度雜交條件進行連接，在高特異性和嚴格性下進行 SNPs 的精準檢測。
本公司Taq DNA ligase是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義
1活性單位指在45℃下， 1× Taq DNA ligase反應緩沖體系下，15 min內能使 50% 的 1 μg 經 BstEII 消化的 λDNA 片段（12 bp 粘性末端）發生連接所需要的酶量。
活性測定條件
20 mM Tris-HCl，25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100（pH 7.6 @ 25℃），45℃ 溫育。
濃度：40U/μl
保存條件：-20℃可保存2年，避免反復凍融
特點與適用范圍
? 耐熱性好
? 用于 Gibson 組裝方法
? dsDNA 切刻連接修復
? 可用連接酶鏈式反應（ligase chain reaction, LCR）、連接酶檢測反應，檢測等位基因特異性
產品包裝規格及組成
Component | AE1308A | AE1308B |
Taq DNA Ligase | 2000U | 10000U |
10× Taq DNA Ligase Buffer | 0.5ml | 1.5ml |
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，200 μg/ml BSA，50% Glycerol，pH 7.4 @ 25°C
相關產品
AE1310: N9 DNA ligase等
應用實例
1. 連接反應
1）按下表配制反應體系
反應組分 | ul |
10× Buffer | 2 |
底物：互補粘性末端>8nt的DNA | 100ng-1μg |
Taq DNA ligase (40U/μl) | 1-2 |
H2O | Variable |
總體積 | 20 |
2）45-50°C連接15min
3）對于較長的雙鏈DNA底物，瓊脂糖電泳檢測連接產物；對于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測連接產物。
警告: 本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。
注意事項
l Taq DNA 連接酶可以有效連接 12 bp 的互補片段，但無法連接 4 bp 的互補片段（典型限制酶消化產物）。
l 反應條件：將DNA和酶在45℃的1× Taq DNA連接酶緩沖液中或在熱循環儀中孵育15分鐘，用50％甘油，50 mM EDTA，溴酚藍的混合物終止反應。
l 1× Taq DNA連接酶反應緩沖液需要NAD +作為輔助因子。NAD +在10× Taq DNA連接酶反應緩沖液中提供；緩沖液應儲存在-80°C下以延長NAD +輔因子的半衰期。
